一、仪器基本信息
仪器型号：STELLARIS
生产厂家：Leica
购置时间：2023-6
所属技术服务部：形态学实验技术服务部
放置位置：科技大楼204 共聚焦显微镜室
管理人员：缪丹 15605181877 孙友 15056859175
仪器应用：可清晰显示细胞内细胞器（如线粒体、内质网、高尔基体）的精细结构，以及细胞骨架（微管、微丝）的分布和动态变化。例如，通过荧光标记肌动蛋白，能实时观察细胞迁移过程中骨架的重组。利用荧光共振能量转移（FRET）技术，结合共聚焦成像，可研究蛋白质之间的相互作用（如信号通路中蛋白的结合与分离），或特定分子（如离子、核酸）在细胞内的时空分布。通过时间序列扫描，记录细胞分裂、胞吞胞吐、凋亡等动态过程，生成三维动态影像，揭示细胞活动的机制。
二、仪器操作流程
一）开机
1、开机顺序：依次打开共聚焦控制单元左侧上方的“POWER”、“LASER”、两个按钮，将“Emission”上的激光开关钥匙旋至“ON”。（开机顺序为1→4）
2、电脑进入操作系统界面后，双击电脑桌面“LASX”图标启动共聚焦操作软件。
3、系统自检完后，进入LASX操作界面，点击界面最上方“Configuration”按钮进入配置界面→点击左边“Laser Config”按钮→打开所需激光（OFF→ON）。
二）图像采集
1、显微镜镜下观察样品、寻找拍摄目标。可通过显微镜前的触摸屏对物镜切换、观察方式切换等进行控制。
2、使用Dye assistant 选择所需的染料，拍摄方式选择最后两个中的一个。
3、点击“Fast live”进行图像预览，点击该按钮右侧的圆点可进入“Fast live”的参数设置界面，可设置预览时扫描分辨率（Format），扫描速度（Frequency）等。
4、在预览的状态下，选中某一个Setting，对该序列中的图像通过调节Control panel 中的Smart Gain，Smart Intensity 等设置拍摄参数。Format选择1024x1024或更高的扫描分辨率；Speed处选择400或者更慢的扫描速度。点击软件下方Start，进行图像拍摄。
三）Z轴层切
1、XYZ扫描模式为默认采图模式。
2、设置采图参数，方法同前。
3、点击“Live”进行图像预览。用Control panel的“Z-Position”旋钮调节z轴至层切所需的起点，点击“Begin”上方的黑色箭头定义层切起点（箭头变为红色表示已定义）；调节z轴至层切所需的终点，点击“End”上方的黑色箭头定义层切终点。
4、点击“Stop”终止图像预览。
5、此时xyz层切菜单中显示的“z-step size”（相邻两个光切面的间距）和“Nr．of steps”（层切数目）为系统的优化值（“system optimized”）。也可点击“Nr.Of steps”左侧的按钮，然后对相邻光切面间距或层切数目进行自定义。
四）时间序列成像：
1、在“Acquire”菜单栏的“Acquisition”中选择xyt扫描模式后，将出现xyt扫描菜单。
2、设置光路参数，方法同前。
3、定义“Time Interval”，即采集相邻两帧图像所需的时间间隔，也可选择最小值“Minimize”。按采图需要选择“Acquire until stopped”、“Duration”或“Frames”。“Acquire until stopped”，则图像将持续采集，直至手动终止。若选择“Duration”，可定义采图所需的总时间。若选择“Frames”，可定义所需的图像帧数。选择合适的分辨率和扫描线速度，点击“Start”进行时间序列图像的采集。
五）LIGHTNING 超高分辨率成像
在“Acquire”界面下，在左上角处点击“STELLARIS”，在下拉菜单中选择LIGHTNING LIGHTNING 界面：在Mounting medium 处选择样品的封片剂。设置光路参数，方法同前。点击 Start experiment 进行图像采集
六）保存图像及导出
1、图像文件的操作：
“Acquire”的“Open projects”下显示采集的所有图像文件名称，右键点击图像文件名，可进行多种操作。点击“save project”，原始文件保存格式为.lif，只能通过LeicaX软件打开。
2、图像文件的输出：右键点击图像文件名，选择“Export”进行图像输出，可输出成图片（．tiff 或.jpeg），三维或多维图像还可输出成电影（.avi）。
七）关机
保存已采集的图像。关闭所有激光。若使用过油镜，需用无水乙醇清洁镜头。关闭LASX软件，关闭电脑。在共聚焦控制单元处，先将钥匙旋转至“off”。关闭“Laser”和“Power”开关。
三、仪器注意事项
1、根据样品类型和观察需求选择物镜：高倍物镜（如63×、100×）用于精细结构，低倍物镜（如 10×、20×）用于大范围定位。
2、物镜需与盖玻片厚度匹配（如油镜需使用专用immersion oil，避免干镜用油或油镜干用，以防损伤镜头）。
3、更换物镜前需降低载物台，避免镜头碰撞样品或载物台。
