一、仪器基本信息

仪器型号：IVIS Lumina III

生产厂家：PerkinElmer

购置时间：2005.04

所属技术服务部：实验动物技术服务部

放置位置：第五实验楼2楼212室（里间）

管理人员：李增民 13970775604

欧阳经鑫 15797670813

工作原理：小动物活体成像主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。生物发光是用荧光素酶（Luciferase）基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP, Cyt及dyes等）进行标记。借助灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。

仪器应用：通过这个系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。通过采集生物自发光或荧光标记信观测获得生物体内荧光量的变化、迁移情况，完成动植物体内基因表达的原位跟踪，观察肿瘤的生长及转移的发展过程，排除了动物个体差异对实验结果的影响。多用于药物筛选和药效检测，植物突变检测和筛选，肿瘤学研究，免疫学和干细胞研究，基因治疗研究，蛋白质相互作用、信号传导研究 ，癌症与抗癌药物研究，病理机制及病毒研究，基因表达和蛋白质之间相互作用，转基因动物模型构建，药物甄选与预临床检验，药物配方与剂量管理等。

二、仪器操作流程

小动物活体成像操作说明

1、开机（开机前先确保通过小动物呼吸麻醉机进行动物的完全麻醉，麻醉步骤详见小动物呼吸麻醉机使用指南，小动物放入暗箱前将麻醉气体转换开关由“Chamber”拨向“Mask” 指示方向, 将动物口鼻紧贴Mask管口，维持麻醉状态，并注意观察，严防苏醒逃逸！）

1）打开电脑

2）打开仪器开关（Lumina III总开关位于仪器后方右侧下方的黑色按钮）；

3）打开软件“”后输入桌面上标示的密码，直接点击“OK”；

4）点击“Initialize”让仪器进行自检；

自检完成后，软件控制界面的所有选项为高亮可以选择的状态，CCD相机处于降温状态（默认设定温度为-90 ℃），载物台处于升温状态（默认设定温度为37 ℃），“Temperature”进度条此时处于红色状态，3-5 min相机降至合适温度后此进度条将变为绿色；

2、保存路径的设置

选择“Acquisition中的Auto-Save to”选择保存路径（建议学生在Data(D:)中创建一个属于自己的文件夹）；

备注：

数据导出后原始数据所在的路径中不可以含有中文，否则数据可能会产生不可逆的损坏；

请及时拷出数据，实验室会不定时清理电脑中的数据； 

3、小动物生物发光二维拍照模式参数

备注:

1）一般设置为自动曝光即可，若需要使用固定的曝光时间，点击“Auto”后输入曝光时间；

2）“Auto”模式下最长曝光时间为60 s，若此情况下无信号可以手动输入120 s；

3）若同批小鼠需要连续拍摄多张，可勾选“Number of Segment”后输入拍摄次数和每次拍摄的时间间隔；

4、小动物荧光二维拍照模式参数

备注:

1）除了仪器中已设置好的染料外可以点击“Input Ex/Em”手动输入激发和发射波长；

2）荧光成像推荐使用激发/发射大于600 nm的染料进行实验；

3）波段小于600 nm的染料或信号特别弱时，建议使用光谱拆分模式进行拍摄，以便得到最佳的实验结果；

4）一般设置为自动曝光即可，若需要使用固定的曝光时间，点击“Auto”后输入曝光时间；

5）“Auto”模式下最长曝光时间为60 s，若此情况下无信号可以手动输入120 s；

6）若同批小鼠需要连续拍摄多张，可勾选“Number of Segment”后输入拍摄次数和每次拍摄的时间间隔；

5、图像及数据分析

1）图片加载成组（同批实验建议实验结束后进行批量处理）

2）图片处理

备注:

不同拍摄模式进行图片处理前需要使用合适的单位。荧光成像，“Units”选择“Radiant Efficiency ”单位为：

。生物发光，“Units”选择“Radiance ”单位为：Photons/second/cm2/sr；

保存图片时可以将实验结果保存在一张图片上，也可以选择需要保存的结果双击后再单独保存；

3） 计算荧光强度

备注:

建议保存含ROI的图片，以便后续检测ROI圈选区域是否合适；

6、关机

1）按照“麻醉机的使用”中的相关要求关闭麻醉机；

2）关闭软件；

3）关闭仪器电源；

4）关闭电脑。

三、小动物活体成像仪器注意事项

仪器环境要求：

1. 电源要求：交流110V~240V，额定功率2500VA。接地电阻<3Ω。

2. 环境温度：15 °C 至 25 °C 。

3. 环境湿度：<60% ，无结露现象。

日常保养：

1. 避免阳光直射：如可将仪器放在实验室阴面一侧，如放阳面，可安装遮挡窗帘。

2. 严格控制环境湿度，屏障外仪器需加装抽湿机，控制环境湿度< 60%。

3. 避免震动：勿将仪器与大型离心机放置于同一桌面。

4. 保证空间：仪器周围要预留足够空间用于动物和样品操作。

5. 每次实验结束后，用干的酒精棉擦拭成像台或更换黑色胶纸，保证成像仓整洁、干净。

6. 仪器长久不用如寒暑假时，关闭主机、软件，并切断电源。

7. 仪器长年不用时，应定期开机，唤醒仪器使其处于良好工作状态。

8. 建议加装 功率1500VA 的UPS 。

注意事项：

1. 湿度低于60% ，强行开机拍照易损害摄像头，一经发现温湿度不符合条件应立即停用，并报告管理员。

2. 成像仪放置动物的暗箱内有多处缝隙可藏匿逃逸小鼠，如升降台底部角落，顶部滤光片转盘处。严禁在动物未完全进入麻醉状态下放入小鼠，实验中应保证足够的麻醉维持剂量。严格核实放入和取出的小鼠数量，一经发现逃逸，立即联系管理员，停机维修处理！

附：小动物呼吸麻醉机使用指南（小动物活体成像仪或小动物断层扫描CT机所附带的关键部件）

工作原理：气体麻醉的基本原理是氧气与麻醉气体（异氟烷等）混合后，经过麻醉面罩供给小动物吸入进行麻醉。吸入式麻醉相较于传统注射麻醉具有精准可控、代谢毒性小、苏醒迅速、操作方便、符合动物福利等优点，大大提高了动物手术的成功率，被全球科研工作者广泛认可和应用。

使用步骤示图：

注意事项：

实验后操作当麻醉实验完成后，请按以下步骤进行操作：

1)将蒸发器刻度盘旋至“0”刻度；

2)按下快速充氧按钮，以便清除麻醉诱导盒中的麻醉气体；

3)关闭空气泵开关，拔掉电源；

4)仔细清洁麻醉机诱导盒及面罩（清除诱导盒内的鼠粪便和污渍），填写使用登记表。