一、仪器基本信息
仪器型号：Waters e2695
生产厂家：沃特世
购置时间：2018.05
所属技术服务部：分子结构分析技术研发部
放置位置：科技大楼1楼液质室
管理人员：郝宏艳 19857104829
技术骨干：林雅俊 15707973853
仪器应用：科研实验应用：1、材料科学：研究聚合物和其他材料的分子特性，进行材料的表征。2、环境监测：分析水和土壤样品中的污染物，研究环境样品的化学成分；3、生物样品分析：分析血液、尿液等生物样品中的药物和代谢物；4、食品安全检测：检测食品中的添加剂、污染物和营养成分，确保食品安全
二、仪器操作流程
1. 开机。先打开电脑，依次接通2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约1min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ldle”时，仪器进入待命状态。
2. 脱气（Degasssger）。按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status(1)”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。
3. 设定柱温及样品室温度（可选项）。在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter，光标移至“Sample”，选择目标温度（4℃-40℃），按“Enter”。（可在工作站方法中设置）
4. 灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“Prime Seal Wash”，显示“Prime Seal Wash”屏幕，按“Start”，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，依次按“Halt”、“Close”、“Exit”。
5. 灌洗针头清洗（Prime Needle Wash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“Prime Ndl Wash”，显示“Prime Needle Wash”屏幕，按“Start”，30s内应见溶剂从废液排放口流出，按“Close”、“Exit”；若想要多清洗几次时，请按“Start Again”。
6. 湿灌注（Wet Prime）。在“Status(1)”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime” “OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定(如：5ml/min，3min)，“OK”即可。将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通道选25% 5ml/min，3min）
7. 冲洗进样器（Purge Injector)。按“Menu/Status”进入“Status(1)”画面，在设定溶剂画面中设定适当的流速与溶剂比例（针对缓冲盐或离子对试验，建议设定50%乙腈：50%水的溶剂来清洗进样器），按“Direct Function”键，选择“Purge Injector”，“OK”，默认数值为6，“OK”)，
注: 以上1.5-1.8为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则可重复1.8直至排除。
8. 平衡柱子。在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再Wet Prime操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱30-60min。(可在工作站中设置)。
9. 编辑仪器方法和方法组
9.1 打开电脑后，双击桌面上的Empower，输入用户名system、密码manager，选择“运行样品”。
9.2 新建仪器方法。进入“运行样品”后，选择“创建方法组”调用方法组编辑向导。出现“新建方法组——选择仪器方法”，单击“新建”来创建新的仪器方法，此时出现“仪器方法编辑器”界面，按相关的要求填写各参数，根据需要编辑不同的方法，编辑完毕后单击“文件”“另存为”后出现“保存仪器方法”对话框，输入此方法用于的测定药品名称，单击“保存”。
9.3 新建方法组：选择所需的方法名称，点击“下一步”，输入方法组名（与方法名一致），即完成方法组的建立。
10. 进样
10.1 在下面的“仪器方法”里选择需要仪器方法并点击“监视器”平衡系统，观察基线。待系统平衡后，点击“中断样品组”开关，终止观察基线。
10.2 当进行单进样时，在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”“方法组”“进样体积”“运行时间”等；然后点击“单进样”图标，或选择上方的“进样”，再选择“进样”，这样就开始了单次进样。单次进样完成分析后系统即停止检测（流动相正常流动）。
10.3 当多进样时，在“运行样品”的“样品”界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所在编号），接着分别设定“样品名称”、“进样体积”、“进样数”/“功能”等采集参数，在“方法组”中选择需要的方法组，在“运行时间”中设定相关的时间。
10.4 开启绿色“运行”或点击“进样”，在选择“运行样品组”，输入样品组名称，运行模式（只运行），适应性模式（出错时继续），点击运行。
10.5 一旦开始运行样品组，画面将自动切换到“正在运行”窗口。
10.6 如果有另外一组样品需要运行的话，也可返回“样品”表单继续编辑新的一组样品，随后单击“运行”，即可在此样品组结束后继续运行新的一组。
10.7 如需修改正在运行样品的测试样品，在“运行样品”的“正在运行”界面，点击“编辑”菜单中“改变当前运行样品的信息”，点击确定，修改样品以后，须重新点击“运行”。
三、仪器注意事项（或相关管理规定）
1．水性流动相使用不要超过二天，最好每天新鲜配制以免微生物的生长。
2．样品组方法里的“功能”一项，有“平衡”及“平衡色谱柱”两个选项，其功能不同。若仪器方法选用梯度，用“平衡色谱柱”可以在进样前运行梯度来平衡柱子；而如果选用“平衡”则只是按照初始梯度条件等度平衡柱子。（当然，如果用等度的流动相条件，则两者没有区别）。
3．清洗柱塞杆的溶剂可以用水，或5%-10%甲醇（抑菌）。
4．清洗针的溶剂可以根据样品溶解性选择，如甲醇，或异丙醇-水（1：1）。
5．“实验结束后要注射器排气泡及清洗（purge injector）”，1次即可，包括了“purge sample loop”。
6．在线脱气机打开后，开始时运行加速，压力很快降到1.0psi以下，然后维持0.5psi左右。
7．怀疑管路堵塞可卸下单向阀和在线过滤器进行清洗。单向阀安装注意方向（箭头朝上）。
8．注射器中的气泡快速有效排除方法：可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除气泡后，注射器中保留少量溶剂，做“purge injector”小心安装上，再做几次“purge injector”观察没有气泡即可。其他方法，可以在“purge injector”开始后、注射器杆向上时，拧掉下边螺丝，上下抽推排除气泡，但手动排泡过程要在purge injector结束前完成。溶剂用甲醇较好,不用同时拧掉上方注射器。
9．当有多个“仪器方法”和“方法组”存在时要注意选择当前需要使用的“仪器方法”和“方法组”；当“仪器方法”改变时尤其是流动相组成等发生变化时，必须对系统重建平衡，也就是在新的“仪器方法”流动相条件下平衡系统30分钟以上，使得基线重新稳定。
10．长期不使用HPLC，应该将色谱柱从系统拆除，拆除前应该充分平衡色谱柱，一般为用甲醇或乙腈冲洗色谱柱40分钟以上。
11．若色谱柱长期保存未使用，则刚装入HPLC系统时应以流量0.2mL/min平衡过夜（注意断开检测器避免不必要的检测器耗损），然后再以0.8mL/min流量平衡30分钟以上。以低流量缓慢的提高流速直到获得稳定的基线，这样可以保证色谱柱的使用寿命。当然在分析结束时冲洗色谱柱及系统后停止流量时也应该从高流量逐步过渡到低流量直到流量为0。
12．系统短期不使用，应该在每次使用后冲洗系统30分钟以上。
